Reconstitution des peptides lyophilisés
Un peptide lyophilisé se présente sous forme de poudre ou de « gâteau » au fond du flacon. Sa mise en solution conditionne la justesse des concentrations utilisées dans vos essais.
- Équilibrer à température ambiante. Laissez le flacon fermé revenir à température ambiante (15 à 30 min) pour éviter la condensation d’humidité sur la poudre.
- Centrifuger brièvement. Quelques secondes suffisent à rassembler la poudre au fond du flacon.
- Choisir le solvant. L’eau ultrapure convient à la plupart des peptides courts et hydrophiles. Pour les peptides basiques, une solution d’acide acétique à 0,6 % améliore la solubilisation ; pour les peptides acides, un tampon légèrement basique peut être préféré. Testez d’abord sur une petite fraction.
- Ajouter le solvant le long de la paroi. Faites couler le solvant lentement contre la paroi du flacon, puis homogénéisez par rotation douce. Évitez l’agitation vigoureuse, qui favorise la formation de mousse et l’agrégation.
- Vérifier la limpidité. Une solution trouble indique une solubilisation incomplète : un bain à ultrasons de courte durée peut aider.
Travaillez sous hotte à flux laminaire avec du matériel stérile si la solution est destinée à la culture cellulaire, et filtrez sur 0,22 µm si nécessaire.
Stockage & stabilité
- Poudre lyophilisée : 2–8 °C, au sec et à l’abri de la lumière. Pour un stockage de longue durée, la congélation (−20 °C) est possible.
- En solution : préparez des aliquotes à usage unique et congelez-les à −20 °C ou −80 °C. Une solution conservée à 2–8 °C doit être utilisée rapidement.
- Cycles de congélation : limitez les cycles congélation / décongélation, qui dégradent les peptides.
- Résidus sensibles : les séquences contenant Met, Cys ou Trp s’oxydent facilement ; privilégiez des solvants dégazés et un ciel d’azote ou d’argon.
- Traçabilité : notez sur chaque aliquote le nom, le lot, la concentration et la date de préparation.
Lire un certificat d’analyse
Le COA résume les contrôles réalisés sur un lot précis. Les principales rubriques :
- Pureté HPLC : proportion de l’aire du pic principal par rapport à l’aire totale du chromatogramme. Une pureté de 99 % signifie que 99 % du signal UV provient du peptide cible.
- Identité MS : la masse mesurée doit correspondre à la masse théorique de la séquence (tolérance typique ± 1 Da).
- Quantité mesurée : masse réelle de peptide dans le flacon, à comparer à la quantité nominale (par ex. 10,36 mg mesurés pour un flacon de 10 mg).
- Clé de vérification : les rapports Janoshik portent une clé unique permettant de vérifier leur authenticité sur janoshik.com/verify.
- Teneur peptidique nette : la masse de poudre inclut des contre-ions (souvent l’acétate ou le TFA) et de l’eau. La quantité réelle de peptide peut donc être inférieure à la masse nominale ; tenez-en compte pour les calculs de concentration exacts.
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